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Metodología

Metodologia

El ADN es obtenido por diferentes métodos dependiendo del tipo de muestra y es purificado y concentrado para su posterior amplificación. Para este último paso se lleva a cabo la técnica de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), que permite obtener millones de copias de los fragmentos de interés del ADN. Estas regiones del ADN son altamente polimórficas y se las denomina microsatélites o repeticiones cortas en tándem (del inglés Short Tandem Repeats o STRs).

El Laboratorio de Análisis de ADN de la Facultad de Ciencias Médicasa Universidad Nacional de Cuyo, emplea kits comerciales de calidad certificada, como Identifiler/Identifiler Plus y Miniflier (Applied Biosystems, USA), PowerPlex Fusion y PowerPlex 21 (Promega Corporation, USA), ID Plex y HD Plex (Qiagen). Estos kits incluyen dentro de su formulación los 20 marcadores STRs recomendados por el CODIS del FBI y European Standard Set, además de otros marcadores  polimórficos. Los  análisis se llevan a cabo mediante el uso de sistemas automatizados, basados en electroforesis capilar (ABI3130 Applied Biosystems U.S.A); que garantizan la obtención de información altamente reproducible, asegurando la calidad de los resultados. Este equipamiento cuenta con softwares especialmente diseñados para el análisis de datos para identificación humana, que aseguran la fiabilidad del resultado final.

Según el caso y teniendo en cuenta el tipo de muestra y calidad del ADN extraído, se utilizan los siguientes conjuntos de marcadores:

 * Marcadores nucleares: Estos marcadores genéticos se heredan en un 50% de cada uno de los progenitores. De esta forma el hijo comparte un marcador con el padre y otro con la madre, necesariamente. Los marcadores analizados son:

 

D3S1358 D1S1656 D2S441 D10S1248 D13S317 Penta E D16S539 D18S51
D2S1338 CSF1PO Penta D THO1 vWA D21S11 D7S820 D5S818
TPOX D8S1179 D12S391 D19S433 FGA D22S1045 Amelogenina

 

Electroforesis capilar para 22 STRs autosómicos, Amelogenina (indicador del sexo de la muestra) y DYS391(marcador de cromosoma Y)

Marcadores del cromosoma Y: Los individuos de sexo femenino normales presentan el par sexual constituido por dos cromosomas X, en tanto que en los varones se encuentra un cromosoma X y un cromosoma Y. El cromosoma Y tiene la particularidad de ser transmitido de generación en generación sin sufrir cambios, permitiendo la persistencia de la información genética a través de la línea paterna.  El análisis de estos marcadores se realiza empleando kits comerciales altamente optimizados como lo son Y-filer (Applied Biosystems, USA) de 17 STRs o el PowerPlex Y/PowerPlex Y 23 (Promega Corporation, USA)  de 12 y 23 STRs respectivamente. Los marcadores analizados son: 

DYS19 DYS389I DYS389II DYS390 DYS391 DYS392 DYS393 DYS385 a/b
DYS437 DYS438 DYS439 DYS448 DYS456 DYS458 DYS635 GATA H4

 

Electroforesis capilar para 17 STRs del cromosoma Y

Marcadores de cromosoma X: Los varones trasmiten el cromosoma X sin cambios a sus hijas mujeres. Mientras que la madre trasmite un 50% de sus alelos por portar dos cromosomas X. El kit empleado para el análisis es el Argus X12 QS (Qiagen). Los marcadores analizados son:

 

DXS10103 DXS8378 DXS7132 DXS10134 DXS10101 DXS10074  
DXS10135 DXS7423 DXS10146 DXS10079 DXS10147 HPRTB    

 

Secuencia de ADN mitocondrial: La importancia del análisis del ADNmt es obtener resultados a partir de  evidencias donde no se obtuvieron resultados para ADN nuclear, o cuando se desea estudiar la información genética transmitida por línea materna. Las regiones analizadas son: 

  

ADNmt HVRI   

ADNmt HVRII

ADNmt HVRIII

Fragmento de secuencia de ADN mitocondrial